SGLC-LC-314              

 

摘要

 

本文建立了食品（乳饮料）中牛磺酸的HPLC测定方法。参照GB 5009.169-2016中第二法色谱条件并进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18分析食品（乳饮料）中牛磺酸，结果显示，牛磺酸峰形良好，牛磺酸与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测要求。此方法可为食品中牛磺酸的检测提供参考。

 

01

 

1.实验部分

 

1.1实验室分析仪器及耗材

 

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪；

 

色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）

 

纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）

 

SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）

 

LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）

 

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）

 

SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）

 

SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）

 

1.2试剂配制

 

1.2.1 盐酸溶液（1 mol/L）：吸取9 mL盐酸，用水稀释并定容到100 mL。

 

1.2.2 碳酸钠缓冲液（pH9.5）（80 mmol/L）：称取0.424 g无水碳酸钠，加40 mL水溶解，用1 mol/L盐酸调pH至9.5，用水定容至50 mL。

 

1.2.3 丹磺酰氯溶液（1.5 mg/mL）：称取0.15 g丹磺酰氯，用乙腈溶解并定容至100 mL。

 

1.2.4 盐酸甲胺溶液（20g/L）：称取2.0g盐酸甲胺，用水溶解并定容至100mL。

 

1.2.5 乙酸钠缓冲溶液（10 mmol/L，pH 4,2）：称取0.820 g乙酸钠，加800 mL水溶解，用冰乙酸调节pH至4.2，用水定容至1000 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤。

 

1.2.6 沉淀剂I：称取15.0 g亚铁氰化钾，用水溶解并定容至100 mL。

 

1.2.7 沉淀剂II：称取30.0 g乙酸锌，用水溶解并定容至100 mL。

 

1.3标准溶液的制备

 

取牛磺酸对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL含20 μg的溶液，取1 mL与试液同步进行衍生，即得。

 

1.4试样溶液的制备

 

1.4.1 试液提取

 

参考乳饮料项下制备方法：准确称取试样20 g于锥形瓶中，加入40 ℃温水20 mL，充分混匀，至于超声波振荡器上超声提取10 min，冷却到室温。加入1.0 mL沉淀剂I（1.2.6），涡旋混合，1.0 mL沉淀剂II（1.2.7），涡旋混合，转入100 mL容量瓶，用水定容至刻度，充分混匀，样液于5000 r/min下离心10 min，取上清液备用。

 

1.4.1 试液衍生化

 

吸取1 mL1.4.1所得上清液到10 mL具塞玻璃试管中，加入1.00 mL碳酸钠缓冲液（1.2.2），1.00 mL丹磺酰氯溶液（1.2.3），充分混合，室温避光衍生2 h（1 h后需摇晃一次），加入0.10 mL盐酸甲胺溶液（1.2.4），涡旋混合，以终止反应，避光静止至沉淀完全。取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。

 

1.5分析条件

 

色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）

 

柱温：25 ℃

 

检测波长：254 nm

 

流速：1.0 mL/min

 

进样量：20 µL

 

流动相：乙酸钠缓冲溶液（1.2.5）：乙腈=68：32

 

2.  实验结果

 

按照上述色谱条件（1.5）进行采集，对照品溶液和供试品溶液色谱图如下：

 

3.  结论

 

本文建立了食品（乳饮料）中牛磺酸的HPLC测定方法。参照GB 5009.169-2016中第二法的色谱条件并优化，采用色谱柱ShimNex CS C18分析食品（乳饮料）中牛磺酸，结果显示，牛磺酸峰形良好，牛磺酸与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测要求。此方法可为食品中牛磺酸的检测提供参考。